اندوتوکسین چیست؟

فقط توسط گرم منفی ها تولید می گردد و سمیت آنها کمتر ازاگزوتوکسین ها می باشد.

اندو توکسین ها جزء ساختاری دیواره سلولی می باشند و از جنس لیپوپلی ساکارید (LPS ) هستند .

ژن های کد کننده آنزیم های مولد LPS روی کروموزوم باکتری است.

قسمت پلی ساکاریدی اندوتوکسین تنوع آنتی ژنیک زیادی دارد و جهش های زیادی در این قسمت بوجود می آید که منجر به پیدایش نژادهای  متعددی از باکتری ها می شود.

 اندوتوکسین ها با قدرتی به  اندازه  اگزوتوکسین ها سیستم ایمنی را تحریک نمی کنند.

کیت اندوتکسین چیست؟

کیت اندوتکسین مقدار اندوتوکسین را در نمونه های پروتئین، پپتید یا آنتی بادی با استفاده از آزمایش (Limulus Amebocyte Lysate (LAL اندازه گیری می کنند.

غلظت اندوتوکسین در نمونه ها با استفاده از کیت اندوتکسین LAL با استفاده از یک سیگنال chromogenic تولید شده در اثر حضور اندوتوکسین اندازه گیری می شود.

نمونه های اندوتکسین را می توان بر روی یک خواننده جذب میکرو پلاگین در یک نانومتر ۴۰۵ اندازه گیری نمود.

یک منحنی استاندارد با استفاده از استاندارد اندوکسین E. coli همراه با هر کیت اندوتکسین برای محاسبه سطوح و مقدار اندوتوکسین به عنوان ۰٫۱ EU / mL، که در آن یک واحد (EU/mlmL) اندوتوکسین تقریبا برابر با ۰٫۱ نانومتر اندوتوکسین / میلی لیتر محلول می باشد، ایجاد می شود.

نمونه های پروتئینی و آنتی بادی را می توان در حدود ۳۰ دقیقه اندازه گیری نمود.

تعیین مقدار و سطوح اندوتوکسین برای ارزیابی کارایی روش های حذف اندوتوکسین و جلوگیری از ضربه های اندوتوکسیک، التهاب در سلول های کشت سلولی و حیواناتی که با پروتئین های آلوده به اندوتوکسین تزریق می شود اهمیت دارد.

برنامه های کاربردی

مقدار اندوتوکسین در پروتئین، محلول پتید یا آنتی بادی

روش  Limulus Amebocyte Lysate ) LAL ) برای اندازه گیری اندوتوکسین بر مبنای تعامل اندوتوکسین ها با فاکتور C پرونزیم موجود در آمبوسیت های گردش ناپذیر  Limulus polyphemus است.

فعالیت پروتئولیتیک این پروزیم در حضور لیپوپلی ساکارید ها (اندوتوکسین ها) مشتق شده از غشای بیرونی سلول های باکتری گرم منفی مانند E. coli فعال می شود.

آزمایش Chromogenic Limulus Amebocyte Lysate اندازه گیری مقدار اندوتوکسین با اندازه گیری فعالیت این پروتئاز در حضور یک پپتید سنتتیکی می باشد که پس از پروتئولیز پنتایرونیلین (pNA) را آزاد می کند و رنگ زرد تولید می کند که می تواند با خواندن جذب در نانومتر ۴۰۵ اندازه گیری شود.

برای اندازه گیری دقیق میزان اندوتوکسین در یک نمونه، آزمایش LAL با استفاده از یک استاندارد اندوتوکسین غلظت شناخته شده از سوئد E. coli  مشتق شده می باشد.

این استاندارد با هر کیت ارائه شده است و برای ایجاد یک منحنی استاندارد استفاده می گردد.

غلظت اندوتوکسین به وسیله استخراج یک نمونه ناشناخته بر اساس این منحنی استاندارد، مشابه ELISA یا اندازه گیری کل پروتئین تعیین می گردد.